Plasmide Double Nickase (h) p20-ARC: sc-405006-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) p20-ARC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide p20-ARC Double Nickase (h) et le plasmide p20-ARC Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARPC4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) p20-ARC | sc-405006-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARPC4 code pour p20-ARC, une sous-unité centrale du complexe Arp2/3, qui initie des réseaux ramifiés de filaments d’actine indispensables à la formation des lamellipodes, aux ondulations de membrane (membrane ruffling) et au remodelage dynamique du cytosquelette. En régulant la polymérisation de l’actine, p20-ARC contribue à des processus tels que la migration cellulaire, l’adhérence, l’endocytose et la phagocytose, en intégrant des signaux issus des GTPases de la famille Rho et de facteurs promoteurs de la nucléation afin de contrôler la génération de forces dépendantes de l’actine. Une activité Arp2/3 dérégulée et des dynamiques d’actine aberrantes ont été associées à des phénotypes modifiés de motilité et d’invasion cellulaires, ce qui fait d’ARPC4 une cible utile pour étudier les changements du cytosquelette pertinents pour le comportement des cellules cancéreuses ainsi que pour la neurodéveloppement et/ou la fonction des cellules immunitaires.
p20-ARC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARPC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARPC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARPC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARPC4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.