Ox40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401326

概要

TNFRSF4 は、TNF受容体スーパーファミリーに属する誘導性の共刺激受容体である OX40（CD134）をコードしており、主に活性化した CD4+／CD8+ T 細胞および一部の制御性 T 細胞サブセットに発現します。OX40L（TNFSF4）との結合により、OX40 は TRAF アダプターのリクルートと、それに続く NF-κB、MAPK、PI3K/AKT シグナルの活性化を介して、T 細胞の増殖、生存、記憶形成を促進します。この経路はサイトカイン産生、胚中心反応の支持、ならびにエフェクター応答と制御性応答のバランスを調節します。OX40 シグナルの異常な制御は慢性炎症や自己免疫疾患の機序に関与するとされ、がん生物学においても免疫回避や腫瘍関連 T 細胞機能不全との関連が示唆されています。

Ox40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNFRSF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNFRSF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNFRSF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ox40タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ox40シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNFRSF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ox40の機能に不可欠なTNFRSF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNFRSF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ox40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびOx40 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNFRSF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ox40 HDRプラスミド（h）および Ox40 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNFRSF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNFRSF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。