OX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403573-ACT

CD200 (OX2) é uma glicoproteína de membrana do tipo I da superfamília das imunoglobulinas que atua como um ligante de checkpoint imune por meio da interação com o CD200R em células mieloides e outras células do sistema imune. Esse eixo de sinalização suprime a ativação pró-inflamatória, influencia a produção de citocinas e sustenta a tolerância imune em microambientes teciduais, intersectando-se com vias que governam a polarização de macrófagos e micróglia. A expressão de CD200 é amplamente relevante para a comunicação neuroimune, a regulação de respostas inflamatórias e as interações tumor–sistema imune. A desregulação da sinalização CD200–CD200R tem sido associada a condições inflamatórias e neuroinflamatórias e a fenótipos de evasão imune em pesquisas de biologia do câncer.

OX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD200 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD200 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD200, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD200 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OX2 em células tumorais com expressão de CD200 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.