Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ox-LDL R-1: sc-402338-ACT

OLR1 code le récepteur 1 des lipoprotéines de faible densité oxydées (Ox‑LDL R‑1/LOX‑1), un récepteur scavenger qui se lie aux LDL oxydées et à d’autres ligands modifiés à la surface cellulaire et en assure l’internalisation. La signalisation de LOX‑1 influence l’activation endothéliale, les réponses au stress oxydant et des programmes transcriptionnels inflammatoires, en interaction avec des voies dépendantes de NF‑κB et des processus liés aux espèces réactives de l’oxygène. Son expression est inductible par des stimuli pro‑inflammatoires et par un flux sanguin perturbé, ce qui soutient des rôles en biologie vasculaire, dans la formation de cellules spumeuses macrophagiques et dans la gestion des lipides. Une activité et une expression dérégulées d’OLR1 ont été associées à des mécanismes liés à l’athérosclérose ainsi qu’à des contextes plus larges de maladies cardiométaboliques et inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques.

Ox-LDL R-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de OLR1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ox-LDL R-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus OLR1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription OLR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ox-LDL R-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus OLR1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ox-LDL R-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ox-LDL R-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de OLR1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.