Ox-LDL R-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402338-ACT

OLR1 codifica o receptor 1 de lipoproteína de baixa densidade oxidada (Ox-LDL R-1/LOX-1), um receptor do tipo “scavenger” que se liga e internaliza LDL oxidada e outros ligantes modificados na superfície celular. A sinalização de LOX-1 influencia a ativação endotelial, as respostas ao estresse oxidativo e programas transcricionais inflamatórios, interagindo com vias dependentes de NF-κB e processos ligados a espécies reativas de oxigênio. Sua expressão pode ser induzida por estímulos pró-inflamatórios e por fluxo sanguíneo perturbado, sustentando papéis na biologia vascular, na formação de células espumosas por macrófagos e no manejo de lipídios. A atividade e a expressão desreguladas de OLR1 têm sido associadas a mecanismos relacionados à aterosclerose e a contextos mais amplos de doenças cardiometabólicas e inflamatórias, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos.

Ox-LDL R-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de OLR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ox-LDL R-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus OLR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição OLR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ox-LDL R-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus OLR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ox-LDL R-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ox-LDL R-1 em células tumorais com expressão de OLR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.