Plásmido Doble Nickase (h) OTUD7B: sc-403268-NIC

OTUD7B (también conocido como Cezanne) codifica una desubiquitinasa de la familia OTU que edita cadenas de ubiquitina enlazadas por Lys11 y Lys63 para moldear la señalización dependiente de ubiquitina y la estabilidad proteica. Al contrarrestar la ubiquitinación impulsada por ligasas E3, OTUD7B influye en la proteostasis y en la transducción de señales inflamatorias, incluida la dinámica de la vía de NF-κB y las respuestas inmunitarias innatas relacionadas. La actividad de OTUD7B se ha vinculado con la regulación de redes de señalización de citocinas y la adaptación al estrés celular, lo que la hace relevante para estudios de desregulación inmunitaria, inflamación asociada a tumores y vulnerabilidades de la vía de la ubiquitina. La perturbación funcional de OTUD7B ofrece una vía para analizar puntos de control dependientes de la desubiquitinación en programas transcripcionales y complejos de señalización próximos al receptor.

OTUD7B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus OTUD7B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de OTUD7B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de OTUD7B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con OTUD7B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.