OTUD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424913

概要

Otud5は、卵巣腫瘍（OTU）ファミリーに属する脱ユビキチン化酵素であるOTUD5をコードしており、タンパク質基質からユビキチン鎖を除去することで、それらの安定性やシグナル伝達の出力を調節する。OTUD5の活性は、ユビキチン依存的なDNA損傷応答の制御、自然免疫シグナル伝達、ストレスによって制御される転写プログラムと交差し、細胞がチェックポイント活性化と炎症性シグナルをどのように協調させるかに影響を与える。マウスモデルおよび細胞系では、OTUD5に関連する脱ユビキチン化の攪乱により、神経発生や免疫に関連する表現型に結びつく過程において、プロテオスタシスや経路フラックスが変化し得る。これらの特性により、Otud5は、シグナル伝達とゲノム完全性を微調整するユビキチン編集機構を解析するうえで有用なノードとなる。

OTUD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるOtud5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Otud5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Otud5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OTUD5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OTUD5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Otud5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OTUD5の機能に不可欠なOtud5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Otud5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OTUD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOTUD5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Otud5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OTUD5 HDRプラスミド（m）および OTUD5 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはOtud5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のOtud5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。