OTUD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432624

概要

Yod1 は、OTU ファミリーに属する脱ユビキチン化酵素である OTUD2 をコードしており、ユビキチン鎖を加水分解することでタンパク質の安定性やシグナル伝達の強度を制御します。OTUD2 は、プロテオスタシスおよびストレス応答性シグナル伝達経路のユビキチン依存的な制御に関与し、ユビキチン化が経路の活性化と終結を調整する炎症や自然免疫の回路も含まれます。ユビキチンシグナルを組み替えることにより、OTUD2 は細胞の生存／死の意思決定、DNA 損傷応答、ならびに細胞恒常性に関連する転写プログラムに影響を及ぼし得ます。ユビキチン編集の異常は、がん生物学や免疫介在性疾患の機序全般に関与すると示唆されており、Yod1/OTUD2 はマウスモデルにおける経路解析に有用なノードとなります。

OTUD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるYod1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Yod1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Yod1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、OTUD2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、OTUD2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Yod1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• OTUD2の機能に不可欠なYod1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Yod1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• OTUD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびOTUD2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Yod1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  OTUD2 HDRプラスミド（m）および OTUD2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはYod1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のYod1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。