OSCP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404116-ACT

ATP5O codifica a OSCP (proteína conferidora de sensibilidade à oligomicina), uma subunidade central da F1Fo-ATP sintase mitocondrial que estabiliza a haste periférica e acopla a força protomotriz à produção de ATP durante a fosforilação oxidativa. Ao sustentar a geração eficiente de ATP ligada à cadeia de transporte de elétrons, a OSCP contribui para a bioenergética celular, a manutenção do potencial de membrana mitocondrial e a adaptação metabólica à disponibilidade de nutrientes e oxigênio. Alterações na montagem ou na regulação da ATP sintase podem deslocar o equilíbrio redox e promover sinalização de estresse mitocondrial, com relevância para pesquisas sobre neurodegeneração, disfunção cardiometabólica e reprogramação metabólica associada ao câncer. Como proteína mitocondrial codificada no núcleo, a OSCP também serve como uma ferramenta útil para investigar a coordenação mitonuclear e vias de proteostase que impactam a respiração.

OSCP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATP5O sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OSCP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATP5O em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATP5O, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OSCP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATP5O nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OSCP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OSCP em células tumorais com expressão de ATP5O silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.