Plásmido CRISPR de Activación (h) OR2A1: sc-417340-ACT

El OR2A1 humano codifica un receptor olfatorio de la familia de GPCR de clase A que se acopla a la señalización de la proteína G olfatoria para regular la transducción sensorial evocada por odorantes. Tras la unión del ligando, OR2A1 suele activar vías de adenilato ciclasa–AMPc para modular la actividad de los canales iónicos regulados por nucleótidos cíclicos y los programas posteriores de excitabilidad neuronal. Aunque se caracteriza mejor en el epitelio olfatorio, se han descrito transcritos de receptores olfatorios en diversos tejidos periféricos, lo que ha impulsado estudios sobre señalización ectópica de GPCR y regulación transcripcional dependiente del contexto. Los patrones de expresión alterados entre tejidos y estados patológicos han convertido a OR2A1 en un gen marcador útil para investigar la regulación génica de GPCR sensoriales y fenotipos relacionados con la quimiosensación en modelos celulares.

OR2A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OR2A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OR2A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OR2A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OR2A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OR2A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OR2A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OR2A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OR2A1 en células tumorales con expresión de OR2A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.