Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Optineurin Double Nickase Plasmid (h): sc-401851-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Optineurin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Optineurin Double-Nickase-Plasmid (h) und Optineurin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf OPTN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Optineurin: sc-166576
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Optineurin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401851-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Optineurin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401851-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OPTN kodiert Optineurin, einen Ubiquitin-bindenden Adapter, der selektive Autophagie, vesikulären Transport und angeborene Immun-Signalwege miteinander verknüpft. Optineurin fungiert während Xenophagie und Mitophagie als Autophagie-Rezeptor, indem es ubiquitiniertes Frachtgut mit Proteinen der LC3-Familie verbindet, und moduliert NF-κB- sowie TBK1/IRF3-abhängige antivirale Signalwege. Zudem trägt es über Interaktionen mit Myosin VI, Rab-GTPasen und Ubiquitin-Kettenkomplexen zur Aufrechterhaltung des Golgi-Apparats und zur Membrandynamik bei. Eine Fehlregulation oder Mutation von OPTN wurde mit Neurodegeneration und glaukomassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was OPTN zu einem breit untersuchten Knotenpunkt in Netzwerken der Proteostase und inflammatorischen Signalübertragung macht.
Optineurin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des OPTN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von OPTN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die OPTN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit OPTN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.