Plasmide CRISPR d'Activation (m) Olfr713: sc-435112-ACT

Olfr713 (souris) code un récepteur olfactif appartenant à la superfamille des RCPG (GPCR) de classe A de type rhodopsine, qui contribue à la détection des odorants et à la transduction des signaux chimiosensoriels dans les neurones sensoriels olfactifs. Lors de la liaison du ligand, les récepteurs olfactifs se couplent à des protéines G hétérotrimériques afin de réguler l’activité de l’adénylate cyclase, la production d’AMPc, l’ouverture des canaux cationiques activés par les nucléotides cycliques, et la dépolarisation neuronale en aval. L’expression et la fonction d’Olfr713 sont pertinentes pour l’étude de l’identité des neurones sensoriels, du trafic des récepteurs et des mécanismes de désensibilisation des RCPG qui façonnent le codage olfactif. La dérégulation des voies des récepteurs olfactifs est fréquemment utilisée comme lecture au niveau système dans des modèles de neuroinflammation, de neurodégénérescence et d’exposition environnementale, où une signalisation chimiosensorielle altérée peut refléter des changements plus larges de l’état neuronal.

Olfr713 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Olfr713 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Olfr713 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Olfr713 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Olfr713, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Olfr713. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Olfr713 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Olfr713 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Olfr713 dans les cellules tumorales présentant une expression de Olfr713 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.