Particules Lentivirales d'Activation (m) Olfr666: sc-435166-LAC

Olfr666 code un récepteur olfactif chez la souris, appartenant à la grande superfamille des récepteurs couplés aux protéines G (GPCR). Il détecte des ligands odorants et initie la transduction des signaux sensoriels. Lorsqu’ils sont activés, les récepteurs olfactifs se couplent généralement à des protéines G afin de stimuler l’adénylyl cyclase, d’augmenter l’AMPc et d’ouvrir des canaux ioniques dépendants des nucléotides cycliques, convertissant ainsi des signaux chimiques en activité neuronale. Bien qu’ils soient classiquement associés aux neurones sensoriels olfactifs, une expression ectopique de certains récepteurs olfactifs a été rapportée dans des tissus non olfactifs, ce qui a motivé des études sur la signalisation des GPCR au-delà de l’olfaction. La dérégulation des voies médiées par les GPCR est largement pertinente en neurobiologie et pour l’homéostasie cellulaire, ce qui justifie l’exploration de l’expression et de la fonction d’Olfr666 dans des modèles sensoriels et de signalisation.

Les particules d'activation lentivirales Olfr666 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Olfr666 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Olfr666 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Olfr666, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Olfr666. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Olfr666 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.