Plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (m): sc-434195

Présentation

Onecut3 (OC-3) est un facteur de transcription homéobox de la famille ONECUT chez la souris, qui se lie à des motifs d’ADN spécifiques afin de coordonner les décisions de destin cellulaire et la mise en place des tissus au cours du développement. Il contribue à des programmes de régulation génique impliqués dans la différenciation, la morphogenèse et le maintien d’identités cellulaires spécialisées, en s’intégrant à des réseaux transcriptionnels plus larges qui façonnent l’organogenèse. En tant que régulateur nucléaire, OC-3 influence des voies en aval qui gouvernent la spécification des lignages et la maturation, ce qui le rend pertinent pour les études de biologie du développement et de contrôle épigénétique de la transcription. Dans la littérature, une dérégulation des programmes transcriptionnels associés à Onecut3 a été liée à des états de différenciation altérés et à des phénotypes pertinents pour les maladies dans des systèmes modèles où les voies du développement sont perturbées.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Onecut3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Onecut3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Onecut3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine OC-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Onecut3 pour l'étude de la signalisation de OC-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Onecut3 essentiels à la fonction de OC-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Onecut3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le OC-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le OC-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Onecut3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le OC-3 plasmide HDR (m) et le OC-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Onecut3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Onecut3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.