OBFC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405050-ACT

STN1はOBFC1をコードしており、OBFC1は一本鎖DNAに結合し、テロメア末端の保護とゲノム全体における複製ストレス応答の調整を担うCST（CTC1–STN1–TEN1）複合体の中核サブユニットである。OBFC1はテロメアC鎖のフィルイン合成を支え、複製フォークの適切な進行を促進することで、過剰な一本鎖DNAの蓄積や異常なDNA損傷シグナル伝達の誘発を防ぐのに寄与する。DNAポリメラーゼα／プライマーゼとの相互作用やATR依存性チェックポイント経路とのクロストークを介して、OBFC1は複製の再開と染色体安定性の維持に貢献する。CST構成要素の機能異常は、テロメア長の異常、ゲノム不安定性の増大、ならびにDNA複製とテロメア維持の障害を特徴とする疾患への感受性と関連づけられている。

OBFC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STN1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OBFC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STN1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTN1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OBFC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTN1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOBFC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTN1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOBFC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。