OATP-H CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404706-ACT

Humanes **SLCO4C1** kodiert **OATP‑H**, ein organische Anionen transportierendes Polypeptid der Solute-Carrier-(SLC)-Superfamilie, das die natriumunabhängige Aufnahme vielfältiger endogener Metaboliten sowie xenobiotikaähnlicher Verbindungen über Zellmembranen vermittelt. Durch die Regulation des zellulären Einstroms und der Verteilung amphipathischer organischer Anionen trägt OATP‑H zu einer transportervermittelten metabolischen Homöostase bei und beeinflusst die Exposition von Geweben gegenüber zirkulierenden kleinen Molekülen. Expressionsmuster und Transporteraktivität von SLCO4C1 überschneiden sich mit Signalwegen, die Entgiftung, zelluläre Stressantworten und die pharmakokinetische Verarbeitung in Barriere- und Ausscheidungskontexten steuern. Eine veränderte Regulation von SLCO4C1 wurde im Zusammenhang mit renalen und kardiometabolischen Phänotypen untersucht sowie als Modifikator der gewebespezifischen Anfälligkeit gegenüber chemischen und entzündlichen Stressoren.

OATP-H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLCO4C1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

OATP-H Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLCO4C1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLCO4C1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen OATP-H-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLCO4C1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von OATP-H-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des OATP-H-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLCO4C1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.