Plasmide CRISPR d'Activation (h) Nup155: sc-405347-ACT

NUP155 code pour Nup155, un composant central du complexe du pore nucléaire qui contribue à l’intégrité de l’enveloppe nucléaire et au transport sélectif des protéines et des ARN entre le noyau et le cytoplasme. Nup155 participe au trafic nucléocytoplasmique, à l’assemblage du NPC et au remodelage de l’enveloppe nucléaire lié au cycle cellulaire, des processus qui influencent la régulation de l’expression génique et l’homéostasie cellulaire. Une altération de la fonction des pores nucléaires peut perturber la maturation des ARN et les réseaux de signalisation qui dépendent d’un import/export nucléaire régulé, et NUP155 a été associé à des contextes pathologiques humains impliquant des défauts de transport nucléaire, notamment des phénotypes de conduction cardiaque et, plus largement, une physiopathologie liée à l’enveloppe nucléaire. Ces caractéristiques font de NUP155 une cible utile pour étudier comment l’architecture du NPC façonne les programmes transcriptionnels et les réponses au stress.

Nup155 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NUP155 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Nup155 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NUP155 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NUP155, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Nup155. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NUP155 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Nup155 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Nup155 dans les cellules tumorales présentant une expression de NUP155 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.