NuMA Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401570-ACT

Il gene umano **NUMA1** codifica la proteina dell’apparato mitotico nucleare (NuMA), un grande scaffold a coiled-coil che si concentra ai poli del fuso per organizzare le estremità meno dei microtubuli e garantire una corretta segregazione dei cromosomi durante la mitosi. NuMA coopera con il complesso dineina–dinactina e con vie corticali mediate da LGN/Gαi per posizionare il fuso, sostenere l’integrità dei poli del fuso e coordinare la citocinesi e l’architettura nucleare. L’alterazione della funzione di NUMA1 può compromettere la fedeltà mitotica, promuovere l’aneuploidia e modificare le decisioni di polarità cellulare, rendendolo un nodo rilevante per studi sulla stabilità del genoma e su fenotipi associati alla proliferazione. Queste proprietà collegano NuMA a indagini meccanicistiche in biologia del cancro e in biologia cellulare dello sviluppo, dove l’orientamento del fuso e la stabilità cromosomica sono elementi centrali.

NuMA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUMA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NuMA Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUMA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUMA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NuMA. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUMA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NuMA nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NuMA nelle cellule tumorali con espressione di NUMA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.