NuMA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401570-ACT

ヒトのNUMA1は、核分裂装置タンパク質（NuMA）をコードしている。NuMAは大きなコイルドコイル構造をもつ足場タンパク質で、有糸分裂時に紡錘体極へ集積し、微小管マイナス端を組織化して、正確な染色体分配を保証する。NuMAはダイニン–ダイナクチン複合体や、LGN/Gαiを介した皮質側の経路と協調して、紡錘体の位置決め、紡錘体極の構造維持、細胞質分裂および核アーキテクチャの調整に関与する。NUMA1機能が撹乱されると、分裂の忠実性が損なわれ、異数性が促進され、細胞極性の決定にも影響が及びうるため、ゲノム安定性や増殖関連表現型の研究において重要な解析対象となる。これらの特性により、紡錘体の配向と染色体安定性が中心となるがん生物学や発生細胞生物学における機構研究ともNuMAは結び付けられている。

NuMA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NUMA1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NuMA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NUMA1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNUMA1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NuMAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNUMA1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNuMA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNUMA1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNuMA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。