NSUN4 Double Nickase Plasmid (h): sc-415742-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NSUN4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NSUN4 Double-Nickase-Plasmid (h) und NSUN4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NSUN4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NSUN4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-415742-NIC | 20 µg | $410.00 |
NSUN4 kodiert eine mitochondriale RNA‑Cytosin‑5‑Methyltransferase, die mitochondriale rRNA modifiziert und den Aufbau sowie die Stabilität des mitochondrialen Ribosoms unterstützt und dadurch eine effiziente oxidative Phosphorylierung sowie die Synthese von Proteinen der Atmungskette fördert. Über seine Rolle in der mitochondrialen Genexpression beeinflusst NSUN4 die bioenergetische Homöostase, die Qualitätskontrolle der mitochondrialen Translation und stressadaptive Signalwege, die mit dem Zellstoffwechsel verknüpft sind. Eine Dysregulation der mitochondrialen Translation und der Ribosomenbiogenese wurde mit neuromuskulären und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, und NSUN4 wird als Knotenpunkt untersucht, der epitranskriptomische RNA‑Modifikationen mit mitochondrialer Dysfunktion verknüpft. Die Forschung zu NSUN4 liefert zudem Erkenntnisse zu Mechanismen der Proteostase, der Balance reaktiver Sauerstoffspezies und der metabolischen Umprogrammierung in krankheitsrelevanten Kontexten.
NSUN4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NSUN4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NSUN4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NSUN4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NSUN4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.