NSUN2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405097-ACT

NSUN2 (NOP2/Sun RNA-Methyltransferase 2) kodiert eine Cytosin-5-RNA-Methyltransferase, die m5C auf verschiedene RNA-Substrate, darunter tRNAs und mRNAs, überträgt und dadurch die RNA-Stabilität, -Prozessierung und -Translation beeinflusst. Diese epitranskriptomische Aktivität greift über die Modulation der Proteinsynthese und des RNA-Stoffwechsels in Programme der Ribosomenbiogenese, der Zellzyklusprogression und der Stressantwort ein. Eine NSUN2-abhängige Methylierung ist mit der Kontrolle zellulärer Proliferation und Differenzierung verknüpft; Störungen werden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und fehlregulierten Wachstumsprogrammen in unterschiedlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht. Daher wird NSUN2 häufig in Signalwegen untersucht, die die RNA-Qualitätskontrolle, die Translationsregulation und eine stressadaptive Umgestaltung der Genexpression steuern.

NSUN2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NSUN2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NSUN2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NSUN2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NSUN2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NSUN2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NSUN2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NSUN2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NSUN2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NSUN2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.