NSD3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402721-ACT

NSD3（別名WHSC1L1）は、核内のSETドメインを有するヒストンリジンメチルトランスフェラーゼをコードしており、細胞の同一性や増殖に関連する転写プログラムをクロマチンレベルで制御する転写調節因子として機能します。ヒストンへのメチル化マークの付加や他のエピジェネティック共因子との協調を通じて、NSD3はヌクレオソームの配置、エンハンサー活性、RNAポリメラーゼII依存的な遺伝子発現に寄与します。NSD3の機能異常は、8p11増幅や異常な転写依存性が関与する状況を含め、複数のがんで観察されるクロマチン状態の変化と関連付けられています。これらの特性により、NSD3はヒト細胞における腫瘍性シグナル伝達、系譜プログラム、ならびにクロマチン介在性の遺伝子制御に対するエピジェネティックな制御を研究する上で有用な標的となります。

NSD3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NSD3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NSD3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NSD3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNSD3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NSD3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNSD3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNSD3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNSD3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNSD3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。