Partículas Lentivirales de Activación (h) Nrf3: sc-404543-LAC

El gen humano NFE2L3 codifica el factor de transcripción CNC-bZIP Nrf3, un regulador de programas de expresión génica que coordinan la homeostasis redox celular, la proteostasis y la adaptación metabólica. Nrf3 participa en redes transcripcionales sensibles al estrés relacionadas con los elementos de respuesta antioxidante e interactúa con vías que controlan la función del retículo endoplásmico y la regulación del sistema ubiquitina–proteasoma. Al modular la expresión basal e inducible de genes de detoxificación y control de calidad, Nrf3 puede influir en la proliferación, la diferenciación y la señalización inflamatoria de manera dependiente del contexto. La actividad desregulada de NFE2L3/Nrf3 se ha implicado en la biología del cáncer y en otros trastornos vinculados al estrés oxidativo y a una proteostasis alterada, lo que respalda estudios mecanísticos sobre adaptación al estrés y control transcripcional.

Las partículas de activación lentiviral Nrf3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de NFE2L3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Nrf3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción NFE2L3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Nrf3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo NFE2L3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.