Nrf1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421868-ACT

マウスNfe2l1は、細胞のプロテオスタシス（タンパク質恒常性）とレドックスバランスの主要な制御因子であるCNC-bZIP転写因子Nrf1をコードします。Nrf1は、プロテアソームサブユニットの生合成およびユビキチン依存的なタンパク質分解回転を制御する転写プログラムを統括し、小胞体恒常性を抗酸化応答や代謝ストレス応答と結び付けます。NRF2シグナル伝達とのクロストークや、解毒ならびにミトコンドリア関連経路の制御を介して、Nrf1はプロテオトキシックストレス下における細胞のレジリエンス維持に寄与します。Nfe2l1/Nrf1活性の異常は、プロテアソーム機能容量の変化、酸化損傷、代謝機能不全と関連づけられており、神経変性、肝臓生物学、がん細胞のストレス適応に関する機序研究において重要です。

Nrf1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Nfe2l1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Nrf1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Nfe2l1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNfe2l1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Nrf1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNfe2l1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNrf1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNfe2l1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNrf1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。