NOS2/iNOS Double Nickaseプラスミド (h): sc-400066-NIC

ヒトNOS2は、炎症刺激下でL-アルギニンから高出力で一酸化窒素（NO）を産生する、Ca2+非依存性酵素である誘導型一酸化窒素合成酵素（iNOS）をコードする。iNOS由来NOは、レドックス恒常性、S-ニトロシル化、ならびに反応性窒素種（RNS）の生成への影響を介して、自然免疫シグナル伝達、抗微生物防御、酸化／ニトロソ化ストレスを調節する。NOS2の発現は、NF-κB、JAK/STAT、MAPKカスケードなど、サイトカインおよびパターン認識受容体によって駆動される経路により制御される。NOS2活性の制御異常は慢性炎症や組織傷害と関連付けられており、腫瘍微小環境の生物学、神経炎症、心血管・代謝ストレス応答の文脈で頻繁に研究されている。

NOS2/iNOS ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NOS2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NOS2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NOS2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NOS2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。