NOS2/iNOS CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400066-ACT

ヒトNOS2は誘導型一酸化窒素合成酵素（iNOS）をコードしており、炎症に応答して誘導される酵素として、L-アルギニンから一酸化窒素（NO）を産生し、レドックスシグナル伝達、血管調節、抗菌防御を制御します。NOS2/iNOSはNF-κBおよびJAK/STATにより駆動されるサイトカイン経路によって強く制御され、ニトロソ化ストレスと酸化ストレスを介して細胞代謝やミトコンドリア機能を再編成し得ます。NOS2活性の制御異常は、DNA損傷応答、血管新生、免疫細胞の分極化への影響を通じて、慢性炎症状態、宿主—病原体相互作用、腫瘍関連の免疫リモデリングと関連づけられています。NOシグナルの状況依存的なメディエーターとして、NOS2はマクロファージ、上皮細胞、がんモデルで広く研究され、炎症回路やストレス適応の解明に用いられています。

NOS2/iNOS CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NOS2/iNOS CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NOS2/iNOSの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNOS2/iNOS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNOS2/iNOS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。