NOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-433993

概要

セリン／スレオニン／チロシンキナーゼ1（Styk1、別名NOK）は、増殖因子応答性シグナル伝達や上皮細胞の挙動の制御に関与するとされる、受容体様タンパク質キナーゼをコードします。マウス系では、NOKがMAPK/ERK経路およびPI3K/AKT経路の出力を調節し、増殖・生存・細胞形質転換といった表現型に影響を与えることが示唆されています。STYK1/NOK活性の変化は、腫瘍性シグナル伝達の文脈と関連づけられており、腫瘍生物学の作用機序やキナーゼ駆動性ネットワーク再配線の解析において重要です。これらの特性により、Styk1は受容体キナーゼ間クロストーク、下流のリン酸化イベント、ならびにストレス適応型シグナルプログラムを解明するための有用なノードとして位置づけられます。

NOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるStyk1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Styk1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Styk1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NOKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NOKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Styk1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NOKの機能に不可欠なStyk1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Styk1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNOK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Styk1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NOK HDRプラスミド（m）および NOK HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはStyk1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のStyk1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。