NOD2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400668-ACT

ヒトNOD2（nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 2）は、ムラミルジペプチドなどの細菌由来ペプチドグリカン断片を検知し、自然免疫シグナル伝達を開始する細胞質内のパターン認識受容体です。活性化されると、NOD2はRIPK2を介してNF-κBおよびMAPK経路を活性化し、炎症関連遺伝子の発現、抗菌応答、上皮バリアの恒常性を制御します。さらにNOD2は、骨髄系細胞や腸管上皮細胞において、オートファジー関連過程や微生物センシングとも連携します。NOD2シグナルの遺伝学的・機能的な撹乱は、宿主—微生物相互作用の破綻や炎症性表現型と関連しており、粘膜免疫や感染関連炎症モデルにおける研究対象として重要性が支持されています。

NOD2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NOD2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NOD2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NOD2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNOD2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NOD2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNOD2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNOD2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNOD2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNOD2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。