Nociceptin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421945

Panoramica

Pnoc codifica la nociceptina/orfanina FQ, un neuropeptide endogeno che funge da ligando del recettore oppioide-simile 1 (OPRL1/NOP) e modula l’eccitabilità neuronale e la trasmissione sinaptica. La segnalazione della nociceptina attiva vie accoppiate a Gi/o che riducono l’attività dell’adenilato ciclasi, regolano gli output cAMP/PKA e influenzano la conduttanza dei canali ionici e il rilascio di neurotrasmettitori. Nel sistema nervoso centrale e nei tessuti periferici, questo asse contribuisce alla regolazione della nocicezione, della risposta allo stress, dei circuiti della ricompensa e della funzione neuroendocrina. La disregolazione della segnalazione PNOC–NOP è stata implicata in fenotipi rilevanti per l’elaborazione del dolore, comportamenti di tipo ansioso e depressivo, neuroadattamenti legati all’uso di sostanze e modulazione dell’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nociceptin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pnoc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pnoc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pnoc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nociceptin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pnoc per lo studio della segnalazione di Nociceptin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pnoc critici per la funzione di Nociceptin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pnoc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nociceptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Nociceptin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pnoc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nociceptin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Nociceptin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pnoc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pnoc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.