Nociceptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421945

概要

Pnoc は、オピオイド受容体様 1 受容体（OPRL1/NOP）に対する内因性神経ペプチドリガンドであるノシセプチン／オルファニンFQ をコードしており、神経細胞の興奮性およびシナプス伝達を調節します。ノシセプチンシグナルは Gi/o 共役経路を介してアデニリルシクラーゼ活性を低下させ、cAMP/PKA 系の出力を調整するとともに、イオンチャネルのコンダクタンスや神経伝達物質放出に影響します。中枢神経系および末梢組織において、このシグナル軸は侵害受容、ストレス応答性、報酬回路、神経内分泌機能の制御に寄与します。PNOC–NOP シグナルの破綻は、疼痛処理に関連する表現型、不安・抑うつ様行動、物質使用に伴う神経適応、ならびに炎症調節に関わる変化と関連づけられています。

Nociceptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPnoc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pnoc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pnocのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nociceptinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nociceptinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pnoc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nociceptinの機能に不可欠なPnocエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pnocゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nociceptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびNociceptin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pnoc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nociceptin HDRプラスミド（m）および Nociceptin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPnocホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPnoc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。