NK-2R CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403149

概要

TACR2はヒトのニューロキニン2受容体（NK-2R）をコードしており、ニューロキニンAなどのタキキニンによって活性化され、主としてGq/11シグナル伝達に共役するクラスAのGPCRです。受容体の活性化によりホスホリパーゼCβが刺激され、イノシトール三リン酸（IP3）／ジアシルグリセロール（DAG）の産生、細胞内Ca²⁺動員、PKC/MAPK経路の活性化が下流で誘導され、転写および収縮に関わるプログラムが形成されます。NK-2Rは平滑筋、消化管および呼吸器組織、ならびに一部の神経集団に発現し、運動機能、気道トーヌス、神経原性炎症シグナルの制御に関与します。TACR2シグナルの異常は、平滑筋応答性の変化や炎症回路の調節異常と関連づけられており、喘息様の気道過敏性、消化管運動障害、疼痛に関連するニューロペプチド経路のモデルにおける研究対象として支持されています。

NK-2R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTACR2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TACR2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TACR2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NK-2Rタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NK-2Rシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TACR2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NK-2Rの機能に不可欠なTACR2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TACR2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NK-2R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNK-2R CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TACR2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NK-2R HDRプラスミド（h）および NK-2R HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTACR2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTACR2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。