NIRF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403908

Panoramica

UHRF2 codifica NIRF, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger e regolatore epigenetico implicato nell’accoppiamento della segnalazione mediata dall’ubiquitina con il controllo dell’espressione genica basato sulla cromatina. NIRF contiene domini che supportano il riconoscimento di istoni modificati e degli stati di metilazione del DNA, collegandolo al mantenimento dell’informazione epigenetica durante la replicazione del DNA e alla regolazione della progressione del ciclo cellulare. Attraverso la proteostasi mediata dall’ubiquitina e il rimodellamento della cromatina, UHRF2 può influenzare le risposte al danno del DNA e i programmi trascrizionali che governano proliferazione e differenziamento. La disregolazione dell’espressione o dell’attività di UHRF2/NIRF è stata associata a paesaggi epigenetici alterati osservati in molteplici contesti oncologici e neurobiologici, rendendolo rilevante per studi sulla stabilità del genoma e sulla segnalazione oncogenica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NIRF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UHRF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UHRF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UHRF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NIRF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UHRF2 per lo studio della segnalazione di NIRF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UHRF2 critici per la funzione di NIRF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UHRF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NIRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NIRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UHRF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NIRF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NIRF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UHRF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UHRF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.