Plásmido CRISPR de Activación (m) NIF-1: sc-435958-ACT

Zfp335 codifica la proteína nuclear murina NIF-1, un regulador transcripcional implicado en el control de la expresión génica asociado a la cromatina durante el desarrollo y la especificación de linajes. NIF-1 se ha vinculado a programas transcripcionales relacionados con receptores nucleares y con Notch, lo que respalda una regulación coordinada de la proliferación y la diferenciación. En contextos inmunitarios y neurales, las redes transcripcionales dependientes de Zfp335 contribuyen a decisiones de destino celular y al mantenimiento de la homeostasis tisular. La desregulación de estos procesos es relevante para estudios mecanísticos de trastornos del desarrollo, disfunción inmunitaria y estados transcripcionales oncogénicos, sin implicar un resultado clínico.

NIF-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zfp335 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NIF-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zfp335 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zfp335, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NIF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zfp335 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NIF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NIF-1 en células tumorales con expresión de Zfp335 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.