NHERF-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-424152-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NHERF-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NHERF-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und NHERF-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc9a3r1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NHERF-1: sc-271552
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NHERF-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424152-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc9a3r1 kodiert NHERF-1, ein PDZ-Domänen-haltiges Gerüstprotein (Scaffold), das membranständige Signalkomplexe organisiert und Transporter sowie Rezeptoren mit dem Aktinzytoskelett koppelt. In Mauszellen koordiniert NHERF-1 Prozesse wie Ionentransport und Rezeptor-Trafficking, indem es mit Proteinen wie Na⁺/H⁺-Austauschern, GPCRs und Rezeptor-Tyrosinkinasen interagiert und dadurch nachgeschaltete Signalwege beeinflusst, die epitheliale Polarität und Signalintegration steuern. Über diese Scaffold-Funktionen trägt NHERF-1 zur Regulation der Dynamik der Phosphoinositid-Signalgebung und zum Zytoskelett-Remodeling an der Plasmamembran bei. Eine Fehlregulation NHERF-1-abhängiger Komplexe wurde in der Literatur mit veränderter epithelialer Homöostase und Signalprogrammen in Verbindung gebracht, die für die Nieren- und Gastrointestinalphysiologie relevant sind, sowie mit der Modulation onkogener Signalwege in Modellsystemen.
NHERF-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc9a3r1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc9a3r1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc9a3r1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc9a3r1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.