NHERF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424152
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- NHERF-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico NHERF-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:NHERF-1 Anticorpo (A-7): sc-271552
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
NHERF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424152 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Slc9a3r1 codifica a NHERF-1 (fator regulador 1 do trocador Na⁺/H⁺), uma proteína de ancoragem com domínio PDZ que organiza receptores de membrana, transportadores iônicos e proteínas de sinalização no córtex apical. A NHERF-1 conecta complexos como o NHE3 a adaptadores do citoesqueleto (por exemplo, ezrina) para coordenar o transporte iônico epitelial, a polaridade e a estrutura das microvilosidades, além de modular a dinâmica de sinalização de GPCRs e de receptores tirosina-quinase. Por meio dessas interações, influencia processos como endocitose, tráfego intracelular e vias de sinalização dependentes de fosfoinositídeos que moldam a homeostase celular. A desregulação do arcabouço dependente de NHERF-1 tem sido associada à disfunção epitelial e a estados de sinalização aberrantes relevantes para estudos de inflamação, integridade de barreira e remodelamento de vias oncogênicas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO NHERF-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Slc9a3r1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Slc9a3r1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Slc9a3r1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína NHERF-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Slc9a3r1 para a investigação da sinalização de NHERF-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Slc9a3r1 críticos para a função NHERF-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Slc9a3r1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo NHERF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo NHERF-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Slc9a3r1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo NHERF-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR NHERF-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Slc9a3r1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Slc9a3r1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.