Plásmido CRISPR de Activación (m) NFATc1: sc-421863-ACT

Nfatc1 codifica NFATc1, un factor de transcripción regulado por calcio/calcineurina de la familia NFAT que traduce la señalización del receptor de células T en programas duraderos de expresión génica. NFATc1 coordina la activación y la diferenciación inmunitarias al integrar la entrada de Ca2+ con señales de MAPK y AP-1, moldeando la producción de citocinas y las decisiones de linaje en los linfocitos. En el ratón, NFATc1 también está implicado en la osteoclastogénesis y el remodelado óseo a través de vías impulsadas por RANKL, conectando la señalización inmunitaria con la homeostasis esquelética. La actividad desregulada de NFATc1 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y una función alterada de las células inmunitarias, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de señalización, control transcripcional y destino celular.

NFATc1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Nfatc1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NFATc1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Nfatc1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Nfatc1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NFATc1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Nfatc1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NFATc1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NFATc1 en células tumorales con expresión de Nfatc1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.