NF-1X Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421875

Panoramica

Nfix codifica il fattore nucleare I di tipo X (NF-1X), un fattore di trascrizione a legame specifico al DNA che riconosce gli elementi consenso NFI per regolare l’attività di promotori ed enhancer durante lo sviluppo. Nel topo, NF-1X contribuisce alla specificazione delle linee cellulari e ai programmi di maturazione nel sistema nervoso e nel muscolo scheletrico, influenzando l’uscita dal ciclo cellulare, la differenziazione e l’espressione di geni associati alla matrice extracellulare. I fattori della famiglia NF-1 interagiscono con il rimodellamento della cromatina e con reti di co-regolatori trascrizionali per coordinare la tempistica dello sviluppo e l’architettura dei tessuti. Una funzione alterata di NFIX è stata collegata a sindromi dello sviluppo e a fenotipi di crescita e differenziazione modificati, rendendo Nfix un nodo utile per studiare i circuiti di regolazione genica rilevanti per il neurosviluppo e la miogenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-1X (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nfix in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nfix insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nfix a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NF-1X.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nfix per lo studio della segnalazione di NF-1X, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nfix critici per la funzione di NF-1X
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nfix per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NF-1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NF-1X CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nfix. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NF-1X Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NF-1X (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nfix per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nfix definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.