Neurotensin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401958-ACT

ニューロテンシン（NTS）は分泌性のニューロペプチドをコードしており、ニューロテンシン受容体を介してシグナルを伝達することで、神経伝達、神経内分泌分泌、消化管運動、ならびに侵害受容（痛みの処理）を調節します。ヒト組織では、ニューロテンシンによって駆動されるGPCRシグナル伝達が、PLC/PKC、MAPK/ERK、PI3K/AKTなどのセカンドメッセンジャー・カスケードに影響を与え、ペプチド放出を細胞興奮性や転写プログラムの変化へと結び付けます。NTSの発現は神経活動や代謝シグナルによって制御されており、ニューロテンシンシグナルの変調は、複数のモデル系において、ドーパミン作動性経路の破綻、炎症関連シグナル、腫瘍に関連する細胞状態と関連付けられています。これらの特徴により、NTSは、ペプチド介在性コミュニケーション、受容体の脱感作、疾患関連文脈における下流経路の再配線を研究するための有用な結節点となります。

Neurotensin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NTSの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Neurotensin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NTS 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNTS転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Neurotensinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNTS遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNeurotensin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNTS発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNeurotensin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。