Neurotensin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401958-ACT

A neurotensina (NTS) codifica um neuropeptídeo secretado que sinaliza por meio de receptores de neurotensina para modular a neurotransmissão, a secreção neuroendócrina, a motilidade gastrointestinal e o processamento nociceptivo. Em tecidos humanos, a sinalização por GPCR induzida pela neurotensina influencia cascatas de segundos mensageiros, incluindo PLC/PKC, MAPK/ERK e PI3K/AKT, conectando a liberação do peptídeo a alterações na excitabilidade celular e em programas transcricionais. A expressão de NTS é regulada pela atividade neuronal e por sinais metabólicos, e alterações na sinalização da neurotensina têm sido associadas a vias dopaminérgicas desreguladas, sinalização relacionada à inflamação e estados celulares associados a tumores em múltiplos sistemas modelo. Essas características tornam NTS um nó útil para estudar a comunicação mediada por peptídeos, a dessensibilização de receptores e a reprogramação de vias downstream em contextos relevantes para doenças.

Neurotensin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NTS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Neurotensin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NTS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NTS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Neurotensin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NTS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Neurotensin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Neurotensin em células tumorais com expressão de NTS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.