neurexin I Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437279-ACT

A neurexina I é uma molécula de adesão celular pré-sináptica que organiza a formação e a maturação das sinapses ao se ligar a neuroliginas e a outros parceiros sinápticos através da fenda sináptica. Em neurônios de rato, ela sustenta a probabilidade de liberação de neurotransmissores, o ancoramento (docking) de vesículas sinápticas e a remodelação de circuitos dependente de atividade, conectando o reconhecimento extracelular ao arcabouço e à sinalização intracelulares. Complexos mediados por neurexina interagem com o posicionamento de canais de cálcio e com a arquitetura da zona ativa sináptica, influenciando o equilíbrio entre excitação e inibição e a conectividade de redes neurais. A desregulação de vias relacionadas à neurexina está associada a mecanismos de doenças do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricas, tornando-a um alvo-chave para o estudo de sinaptopatias e de fenótipos em nível de circuito em sistemas modelo.

neurexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neurexin I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neurexin I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neurexin I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neurexin I em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.