netrin-4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403229

Panoramica

NTN4 codifica la netrina-4, un segnale di guida secreto correlato alle laminine che modula le interazioni cellula–matrice e la migrazione direzionale. La netrina-4 partecipa all’orientamento degli assoni, alla formazione dei pattern vascolari e alla morfogenesi tissutale influenzando l’organizzazione della matrice extracellulare e la segnalazione mediata da recettori che modella la dinamica del citoscheletro. In contesti endoteliali ed epiteliali può influire sull’adesione e sulle proprietà di barriera tramite cross-talk con vie associate a integrine e laminine. Una deregolazione dell’espressione o della segnalazione di NTN4 è stata collegata ad angiogenesi anomala e a comportamento invasivo nel cancro e in altri disturbi che coinvolgono un rimodellamento alterato della membrana basale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO netrin-4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NTN4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NTN4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NTN4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina netrin-4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NTN4 per lo studio della segnalazione di netrin-4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NTN4 critici per la funzione di netrin-4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NTN4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal netrin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal netrin-4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NTN4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal netrin-4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR netrin-4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NTN4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NTN4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.