nestin Double Nickase Plasmid (h): sc-400156-NIC

NES kodiert Nestin, ein Intermediärfilamentprotein der Klasse VI, das in neuronalen Stamm- und Vorläuferzellen stark angereichert ist und dort die Organisation des Zytoskeletts während Proliferation, Migration und Festlegung der Zelllinie unterstützt. Nestin ist an der Umgestaltung des Zytoskeletts und an zellzyklusgekoppelten Programmen beteiligt und integriert Signale aus entwicklungsbiologischen Signalwegen, die Stammzelleigenschaften und Differenzierung regulieren, darunter Notch, Wnt/β‑Catenin sowie wachstumsfaktorgetriebene MAPK/PI3K‑AKT‑Signalgebung. Seine Expression wird широко als Marker für neuroepitheliale Vorläuferzellen und reaktive Astroglia verwendet und wird häufig während Gewebeumbauprozessen und zellulären Stressantworten induziert. Eine fehlregulierte NES-Expression ist mit veränderten Differenzierungszuständen assoziiert und wurde in mehreren Krebsarten sowie in neuroentwicklungsbiologischen Kontexten beschrieben, was NES für die Untersuchung der Vorläuferzellbiologie und krankheitsassoziierter Zellzustandsübergänge relevant macht.

nestin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NES-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NES abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NES-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NES-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.