neogenin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401204-ACT

O NEO1 humano codifica a neogenina, um recetor transmembranar da superfamília das imunoglobulinas que medeia interações célula–célula e célula–matriz importantes para a padronização dos tecidos e o desenvolvimento neuronal. A neogenina liga-se a sinais de orientação, como netrinas e moléculas repulsivas de orientação (RGMs), conectando sinais extracelulares à remodelação do citoesqueleto, à adesão e a vias de migração dirigida. Por meio dessas interações, o NEO1 contribui para a orientação axonal, o crescimento de neuritos e a organização epitelial, e tem sido investigado no contexto de anomalias do desenvolvimento e de alterações associadas ao cancro em programas de invasão e diferenciação. Os seus papéis dependentes do contexto em sinalização e morfogénese tornam o NEO1 um alvo útil para estudar circuitos de orientação e remodelação mediados por recetores.

neogenin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NEO1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

neogenin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NEO1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NEO1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de neogenin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NEO1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de neogenin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via neogenin em células tumorais com expressão de NEO1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.