NEDL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410607

概要

HECW2はNEDL2をコードしており、NEDL2はHECT型のE3ユビキチンリガーゼとして、主要な細胞内基質をユビキチン依存的に修飾することで、タンパク質のターンオーバーやシグナル伝達を制御します。NEDL2の活性はプロテオスタシスに寄与し、調節タンパク質の安定性や利用可能性を左右することで、神経発生、シナプス機能、ストレス応答性の転写プログラムに関連する経路へ影響を及ぼします。HECW2の機能破綻または制御異常は神経発達に関わる表現型と関連づけられており、細胞周期制御、分化、ゲノム完全性に影響し得る異常なユビキチンシグナル伝達という観点から研究されています。ユビキチン経路の構成要素として、NEDL2は基質認識の機構、E2/E3ネットワークの特異性、ならびにシグナル伝達ノードに対する下流作用の解明に有用です。

NEDL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHECW2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HECW2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HECW2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、NEDL2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、NEDL2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HECW2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• NEDL2の機能に不可欠なHECW2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HECW2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• NEDL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNEDL2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HECW2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  NEDL2 HDRプラスミド（h）および NEDL2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHECW2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHECW2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。