Plásmido Doble Nickase (m) NCX3: sc-431066-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)NCX3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa NCX3 (m) y el plásmido de doble nickasa NCX3 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Slc8a3. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) NCX3 | sc-431066-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) NCX3 | sc-431066-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc8a3 codifica el intercambiador Na⁺/Ca²⁺ NCX3 del ratón, un transportador de la membrana plasmática que ayuda a mantener la homeostasis intracelular de Ca²⁺ al acoplar el eflujo de Ca²⁺ (o el influjo bajo condiciones electroquímicas específicas) a los gradientes de Na⁺. Al modular la dinámica del Ca²⁺ citosólico, NCX3 influye en el acoplamiento excitación–contracción, la señalización sináptica y el manejo mitocondrial del Ca²⁺, integrándose así en redes más amplias de señalización del calcio que regulan el metabolismo, la excitabilidad de membrana y las respuestas al estrés. La actividad de NCX3 es especialmente relevante en tejidos excitables donde se requiere una eliminación rápida de Ca²⁺, incluidos neuronas y músculo. La desregulación del intercambio Na⁺/Ca²⁺ y de las vías de sobrecarga de Ca²⁺ se ha vinculado con mecanismos de neurodegeneración, respuestas a lesión isquémica y disfunción celular asociada a miopatías, lo que convierte a Slc8a3 en una diana útil para estudios mecanísticos.
NCX3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Slc8a3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Slc8a3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Slc8a3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Slc8a3 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.