NCX3 Plasmide Double Nickase (m): sc-431066-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NCX3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NCX3 Double Nickase Plasmid (m) e il NCX3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc8a3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NCX3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431066-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NCX3 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-431066-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc8a3 codifica per lo scambiatore Na⁺/Ca²⁺ murino NCX3, un trasportatore di membrana plasmatica che contribuisce a mantenere l’omeostasi intracellulare del Ca²⁺ accoppiando l’efflusso di Ca²⁺ (o l’influsso in specifiche condizioni elettrochimiche) ai gradienti di Na⁺. Modellando la dinamica del Ca²⁺ citosolico, NCX3 influenza l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la segnalazione sinaptica e la gestione del Ca²⁺ mitocondriale, integrandosi così in reti più ampie di segnalazione del calcio che regolano metabolismo, eccitabilità di membrana e risposte allo stress. L’attività di NCX3 è particolarmente rilevante nei tessuti eccitabili in cui è necessaria una rapida rimozione del Ca²⁺, inclusi neuroni e muscolo. L’alterazione dello scambio Na⁺/Ca²⁺ e le vie di sovraccarico di Ca²⁺ sono state collegate a meccanismi di neurodegenerazione, risposte al danno ischemico e disfunzioni cellulari associate a miopatie, rendendo Slc8a3 un bersaglio utile per studi meccanicistici.
NCX3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc8a3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc8a3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc8a3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc8a3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.