NCS-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404303

Panoramica

NCS1 codifica il sensore neuronale del calcio-1 (NCS-1), una proteina conservata legante Ca²⁺ con domini EF-hand che traduce i transitori intracellulari di calcio in output di segnalazione a livello di membrane e sinapsi. NCS-1 regola processi quali il traffico vescicolare e l’esocitosi, la crescita dei neuriti e la modulazione della funzione di recettori e canali ionici attraverso interazioni con bersagli come le fosfatidilinositolo 4-chinasi e complessi di segnalazione che modellano le vie dipendenti dai fosfoinositidi. Nelle cellule umane, NCS-1 contribuisce al controllo calcio-dipendente dell’eccitabilità neuronale e della plasticità sinaptica, collegando il flusso di Ca²⁺ indotto dallo stimolo a risposte adattative a valle. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di NCS-1 sono state investigate nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e neurodegenerativi, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della disregolazione della segnalazione del calcio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NCS-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NCS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NCS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NCS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NCS-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NCS1 per lo studio della segnalazione di NCS-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NCS1 critici per la funzione di NCS-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NCS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NCS-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NCS-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NCS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NCS-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NCS-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NCS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NCS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.