NAT-8 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411236-ACT

Humanes **NAT8** kodiert **NAT-8**, eine in Niere und Leber stark exprimierte N‑Acetyltransferase, die überwiegend an Membranen des endoplasmatischen Retikulums lokalisiert ist und N‑Acetylierungsreaktionen katalysiert, die die Verarbeitung kleiner Moleküle und Xenobiotika beeinflussen. Die NAT‑8‑Aktivität ist mit der metabolischen Homöostase und zellulären Entgiftungsprozessen verknüpft und überschneidet sich mit Signalwegen, die oxidativen Stressantworten und die Funktion tubulärer Epithelzellen mitbestimmen. Genetische Variation und veränderte Expression von NAT8 wurden mit Nierenmerkmalen und einer erhöhten Anfälligkeit für Nierenschäden in Verbindung gebracht, was NAT8 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zu Nephrotoxizität und metabolischem Stress macht. In Zellmodellen kann die NAT‑8‑Expression Phänotypen modulieren, die mit epithelialem Transport, zellulärer Widerstandsfähigkeit gegenüber chemischer Exposition und verletzungsassoziierten Transkriptionsprogrammen zusammenhängen.

NAT-8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NAT8-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NAT-8 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NAT8-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NAT8-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NAT-8-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NAT8-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NAT-8-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NAT-8-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NAT8-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.