Nanos2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404123-ACT

Das humane Gen **NANOS2** kodiert **Nanos2**, ein konserviertes RNA-bindendes Protein, das vor allem dafür bekannt ist, das Schicksal von Keimzellen zu regulieren, indem es posttranskriptionelle Genexpressionsprogramme steuert. Nanos2 ist an Netzwerken zur mRNA-Stabilität und translationalen Repression beteiligt, die dazu beitragen, die Keimbahn-Identität aufrechtzuerhalten und eine unangemessene Differenzierung zu verhindern, und es integriert sich in Signalwege, die Zellzyklusprogression, den Eintritt in die Meiose und das Entwicklungs-Timing steuern. Eine veränderte Aktivität der NANOS-Familie wurde mit Defekten in der Keimzellentwicklung und einer dysregulierten Reproduktionsbiologie in Verbindung gebracht, und die NANOS2-Expression wird häufig als Marker der Linienfestlegung in Entwicklungs- und Stammzellmodellen untersucht. Diese Eigenschaften machen NANOS2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von RNA-Regulons, entwicklungsbiologischen Gennetzwerken und kontextabhängigen transkriptionellen Zuständen.

Nanos2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NANOS2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nanos2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NANOS2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NANOS2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nanos2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NANOS2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nanos2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nanos2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NANOS2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.