NAIF1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410516-ACT

NAIF1 (nuclearer Apoptose-induzierender Faktor 1) ist ein menschliches nukleäres Protein, das an der Regulation des programmierten Zelltods und der Kontrolle der Zellproliferation beteiligt ist. Berichten zufolge stehen die Funktionen von NAIF1 mit chromatinassoziierten Prozessen und Transkriptionsprogrammen in Zusammenhang, die apoptotische Signalwege beeinflussen und es in umfassendere Stressantwort-Netzwerke einordnen, welche Entscheidungen über das Zellschicksal modulieren. Eine veränderte Expression von Apoptose-Regulatoren wie NAIF1 wird häufig im Kontext der Tumorbiologie untersucht, da Verschiebungen in Zellüberleben, DNA-Schadensantworten und Wachstumskontrolle zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen. NAIF1 dient daher als nützlicher Knotenpunkt, um nukleäre Mechanismen zu analysieren, die Genregulation mit Apoptose und zellzyklusbezogenen Ergebnissen koppeln.

NAIF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NAIF1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NAIF1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NAIF1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NAIF1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NAIF1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NAIF1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NAIF1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NAIF1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NAIF1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.