NaDC-3 Double Nickase Plasmid (m): sc-431118-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NaDC-3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NaDC-3 Double-Nickase-Plasmid (m) und NaDC-3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc13a3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NaDC-3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NaDC-3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc13a3 kodiert den natriumabhängigen Dicarboxylat-Transporter NaDC-3 (SLC13A3), einen Symporter der Plasmamembran, der Na⁺-Gradienten an die zelluläre Aufnahme von Di- und Tricarboxylaten wie Succinat, α-Ketoglutarat und Citrat koppelt. Durch die Steuerung der intrazellulären Verfügbarkeit von Intermediaten des Citratzyklus (TCA) und verwandten organischen Anionen beeinflusst NaDC-3 den Intermediärstoffwechsel, das Redoxgleichgewicht und den anaplerotischen Fluss, mit nachgelagerten Effekten auf metabolische Signalwege. In Mausgeweben mit hohem Transportbedarf trägt NaDC-3 zur Handhabung organischer Anionen und zur Metabolitenhomöostase bei – Prozesse, die für die metabolische und renale Physiologie relevant sind. Eine Dysregulation des Dicarboxylat-Transports sowie eine veränderte Succinat-/α-Ketoglutarat-Verwertung können Hypoxie- und Entzündungssignale beeinflussen, wodurch Slc13a3 ein nützliches Ziel für die Untersuchung metabolischer Reprogrammierung und transporterassoziierter Krankheitsmechanismen darstellt.
NaDC-3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc13a3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc13a3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc13a3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc13a3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.