Plásmido Doble Nickase (h) Myosin Vb: sc-403324-NIC

MYO5B codifica la miosina Vb, una proteína motora basada en actina que coordina el tráfico vesicular y la entrega polarizada a la membrana mediante interacciones con GTPasas Rab y con la carga de los endosomas de reciclaje. La miosina Vb regula el reciclaje apical, la polaridad epitelial y la transcitosis, influyendo así en la organización de las uniones estrechas y en la localización de proteínas de membrana en tejidos como el intestino, el hígado y el riñón. La alteración del tráfico dependiente de MYO5B perturba la clasificación endosomal y la expresión en superficie de transportadores y receptores, vinculando cambios en la función de la miosina Vb con defectos en la barrera epitelial y en el manejo de nutrientes. Estos procesos sitúan a MYO5B dentro de las vías centrales de transporte citosquelético y reciclaje de membrana, que se investigan con frecuencia en estudios sobre polaridad celular, dinámica endosomal y mecanismos de enfermedad asociados al tráfico intracelular.

Myosin Vb El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MYO5B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MYO5B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MYO5B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MYO5B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.