myoglobin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401370

Panoramica

MB codifica la mioglobina, una proteina contenente eme che lega l’ossigeno e facilita l’immagazzinamento e la diffusione intracellulare dell’ossigeno nel muscolo striato, sostenendo il metabolismo aerobico durante fluttuazioni della richiesta di ossigeno. Agendo da “tampone” della disponibilità di ossigeno, la mioglobina influenza la fosforilazione ossidativa mitocondriale, l’omeostasi redox e le risposte all’ipossia e alle specie reattive dell’azoto e dell’ossigeno. Alterazioni dell’espressione o della funzione di MB sono state studiate nel contesto di miopatie, danno muscolare correlato all’ischemia e, più in generale, dell’adattamento metabolico delle cellule muscolari. In oncologia e in biologia cardiovascolare, i meccanismi legati alla gestione dell’ossigeno e alle vie dello stress ossidativo associate alla mioglobina vengono spesso indagati come determinanti della fitness cellulare in condizioni di scarsa disponibilità di ossigeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO myoglobin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina myoglobin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MB per lo studio della segnalazione di myoglobin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MB critici per la funzione di myoglobin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal myoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal myoglobin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal myoglobin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR myoglobin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.