MYL9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401577

Übersicht

MYL9 kodiert die Myosin-Leichtkette 9, eine regulatorische Leichtkette, die die Aktin-Myosin-Kontraktilität moduliert, indem sie die Motoraktivität von Myosin II steuert. Ihr Phosphorylierungszustand integriert Signale über die Ca²⁺/Calmodulin-abhängige Myosin-Leichtketten-Kinase sowie die RhoA–ROCK-Signalwege und reguliert dadurch die Bildung von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen und Veränderungen der Zellform. MYL9 trägt zur Kontraktion der glatten Muskulatur bei und ist zudem an nicht-muskelbezogenen Prozessen beteiligt, darunter Zytokinese, Zellmigration sowie kontraktile Antworten von Endothel- oder Fibroblasten. Eine fehlregulierte, MYL9-abhängige Kontraktilität und Zytoskelett-Remodellierung wurde mit verändertem Gefäßtonus, Gewebefibrose und invasiven Zellverhaltensweisen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie relevant sind.

Das MYL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYL9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYL9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYL9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MYL9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYL9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MYL9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYL9-Exone abzielen, die für die MYL9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYL9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MYL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MYL9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYL9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MYL9 HDR-Plasmid (h) und MYL9 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYL9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYL9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.