MYH13 Double Nickase Plasmid (h): sc-400602-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MYH13 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MYH13 Double-Nickase-Plasmid (h) und MYH13 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MYH13 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MYH13 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400602-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MYH13 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400602-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYH13 kodiert Myosin-Schwerkette 13, ein fast-skelettmuskelspezifisches Motorprotein, das im Aktin-Myosin-Sarkomer als ATP-abhängiger Kraftgenerator fungiert. Als Kernbestandteil dicker Filamente trägt MYH13 über den Aktomyosin-Querbrückenzyklus zur Kinetik der Muskelkontraktion, zur Organisation der Myofibrillen und zur Regulation kontraktiler Fasereigenschaften bei. Sein Expressionsmuster verknüpft es mit Signalwegen, die die Differenzierung der Skelettmuskulatur, den Sarkomeraufbau und die Erregungs-Kontraktions-Kopplung steuern. Eine veränderte Zusammensetzung der Myosin-Schwerketten und sarkomerische Dysfunktionen werden mit neuromuskulären und myopathischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch MYH13 ein relevantes Ziel für die Untersuchung von Mechanismen der Muskelfunktion und krankheitsassoziierten Kontraktionsdefekten ist.
MYH13 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MYH13-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MYH13 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MYH13-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MYH13-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.